氯仿(CHCl3)是一种无色、有毒的有机溶剂,具有脂溶性和挥发性。异丙醇(IPA)是一种无色、易挥发、有刺激性气味的溶剂。二者都广泛应用于生物化学实验中。
氯仿异丙醇混合物被称为“氯仿异丙醇萃取液”,常用于蛋白质分离和纯化。其中,氯仿的主要作用是使蛋白质发生变性,形成沉淀,而异丙醇则有助于减少氯仿对蛋白质的毒性和降低沉淀的粘稠度。
蛋白质变性沉淀的原理是,氯仿作为一种有机溶剂,能够破坏蛋白质的氢键、疏水相互作用和离子键等化学键,导致蛋白质的三维结构发生变化,从而失去其生物活性。同时,氯仿还能与蛋白质中的极性氨基酸发生相互作用,使其形成无定形的胶体颗粒,并最终沉淀下来。
而异丙醇则可以降低氯仿对蛋白质的毒性,因为它具有与水相比较相近的分子结构和极性,能够与蛋白质中的水分子发生氢键作用,从而减少氯仿对蛋白质的破坏。另外,异丙醇还能够与蛋白质中的极性氨基酸发生相互作用,降低沉淀的粘稠度,使其更易于分离和纯化。
总之,氯仿异丙醇萃取液作为一种有效的蛋白质分离和纯化方法,其原理是通过氯仿的变性作用使蛋白质形成沉淀,同时异丙醇的添加能够减少氯仿对蛋白质的毒性和降低沉淀的粘稠度,从而实现对蛋白质的高效分离和纯化。